Construction d'une souche de l'herpèsvirus murin 4 exprimant uniquement l'isoforme long de pORF63

Abstract

Les γ-Herpesviridae sont des agents pathogènes dont la prévalence dans la population mondiale reste très élevée (10% à 90%) et variable d’un continent à l’autre. Asymptomatique pour une très grande majorité de la population, cette famille de virus présente une pathogénicité pouvant s’avérer sévère. En effet, certains virus tel que le virus Epstein-Barr (EBV) et l’herpèsvirus associé au Sarcome de Kaposi (KSHV) peuvent induire chez des individus immunodéprimés des cancers en raison d’oncogènes présents dans leur génome. Bon modèle d’étude pour les γ-Herpesviridae, en raison de sa capacité à bien se développer in vitro et à sa conservation de caractéristiques majeures présentes chez les γ-herpèsvirus, l’Herpèsvirus murin 4 (MuHV-4) nous offre la possibilité d'approfondir les connaissances sur la biologie de cette famille de virus si particulière. Les protéines du tégument, dont le rôle est encore peu défini, interviennent dans l’entrée et la sortie des particules virales de la cellule hôte. Bien conservée parmi les Herpesviridae, la protéine du tégument codée par l’ORF63 de MuHV-4 possède deux isoformes, un court et un long. La caractérisation de l’isoforme long ayant été effectuée lors d’études précédentes, il serait alors intéressant de pouvoir connaître les spécificités de l’isoforme court de pORF63. Pour cela, nous devons construire une souche de MuHV-4 n’exprimant que l’isoforme long de pORF63. Une des méthodes pour y arriver est l’utilisation de la recombinaison s’appuyant sur la sélection positive négative basée sur le galk. Cette technique est utilisée deux fois, d’abord pour remplacer le codon START de l’isoforme court puis par l’intégration d’un marqueur sur le gène ORF63 qui permettra de mettre en évidence et de comparer les protéines produites par les différentes souches de MuHV-4 (WT, STOP et LIO).