Analyse de l'impact de mutations induites sur la pharmacologie du récepteur GPR27

Abstract

Les GPCR (récepteurs couplés aux protéines G) constituent la plus grande famille des récepteurs membranaires. Leur caractéristique principale est que lorsqu’ils sont activés, la transduction du signal s’effectue via des protéines hétérotrimériques que sont les protéines G. Cependant, certains de ces GPCR n’activent pas ces protéines G et ont donc un caractère dit « atypique ». Les GPCR sont impliqués dans de nombreux processus physio(patho)logiques et fixent des ligands de natures différentes. En revanche, une centaine de ces récepteurs n’ont actuellement pas de ligand endogène connu et sont donc appelés récepteurs « orphelins ». Le sujet de ce mémoire porte sur l’un de ces récepteurs orphelins qui est le GPR27. GPR27 fait partie de la famille des SREB (Super Conserved Receptor Expressed in Brain). L’hypothèse est que ce récepteur est atypique et donc que sa signalisation ne passe pas par l’activation de protéines G. Au sein de la famille des GPCR, certains motifs d’acides aminés sont très conservés au cours de l’évolution et sont impliqués dans le couplage aux protéines G. En ce qui concerne GPR27, la plupart de ceux-ci ne sont pas conservés, ce qui pourrait expliquer l’absence de couplage aux protéines G observé. L’objectif de ce mémoire est de déterminer si les motifs spécifiques de GPR27, différant des motifs conservés dans les autres GPCR de classe A, lui confèrent son caractère atypique de ne pas coupler aux protéines G. Pour confirmer cette hypothèse, des mutants de GPR27 ont été générés via mutagenèse dirigée afin de restaurer les différents motifs conservés par les autres récepteurs. Ensuite, le couplage aux protéines G des mutants de GPR27 a été évalué dans un test de complémentation à la nanoluciférase. Ce test a nécessité une optimisation de plusieurs paramètres. Lors de l’analyse de l’interaction entre un mutant délété de son ECL2 et la sous-unité Gi, un signal significatif a été détecté. Cependant, lors d’une analyse en concentration-réponse en présence de PTX, l’interaction entre le mutant et Gi1 n’a pas pu être confirmée.