Développement d'un marqueur de qualité spermatique chez le saumon Atlantique Salmo salar et optimisation de la cryoconservation

Abstract

La mise en place de cryobanque spermatique est une alternative prometteuse dans un contexte de production de matériel biologique de repeuplement à des fins de restauration d’espèces menacées et / ou en voie d’extinction. Toutefois, la cryoconservation du sperme nécessite l’utilisation d’un cryoprotecteur et d’un diluant. Ces derniers doivent être appliqués dans un rapport de dilution optimal dans les paillettes et adaptés aux caractéristiques physiologiques du poisson afin de préserver la qualité spermatique (Maise et al., 1998). Malgré ces prérogatives strictes, le processus de congélation-décongélation du sperme génère un stress oxydatif occasionnant des dommages à la membrane en modifiant la qualité du sperme (Lee et al., 2021). A cet effet, notre étude s’est déroulée en deux étapes. En un premier temps il a été proposé de mettre en place un marqueur d’évaluation du stress oxydatif, notamment la peroxydation lipidique (i.e. TBARS) sur les spermatozoïdes de jeunes saumons matures précocement (i.e. tacon 1+). Afin d’induire la réaction adductive MDA-TBARS, l’effet de deux différents tampons (i.e. basé sur l’étude de Figueroa et al.,2018) et présent dans le kit MDA) et de deux méthodes de détection (i.e. fluorimétrie et colorimétrie à longueur d’onde de 532nm) ont été évalués sur le sperme frais et cryoconservé. De cette évaluation, il a été constaté que la cryoconservation pouvait augmenter la peroxydation lipidique signifiant ainsi la sensibilité de la méthodologie. Aucun effet des deux tampons n’a été observé sur le sperme frais et cryoconservé soulignant le potentiel du tampon de lyse de Figueroa. En revanche, une différence significative entre les méthodes de détection a été observée uniquement sur le sperme cryoconservé avec des niveaux plus élevés en colorimétrie qu’en fluorimétrie. Une telle différence est probablement due à la sensibilité différente de ces deux méthodes de détections. En effet, les valeurs obtenues après cryoconservation par fluorimétrie se trouvaient au milieu de la droite de calibration alors qu’en colorimétrie, celles-ci était en dessous de la droite. La peroxydation lipidique évaluée dans la première phase a été validée avec le tampon de Figueroa et en fluorimétrie. Puis, en un second temps il a été évalué l’effet post-cryoconservation de quatre concentrations spermatiques de stockage en paillettes, et ce, dans le but de limiter la variabilité interindividuelle induite par les variations de concentration spermatique au sein des populations. Différents marqueurs de qualité spermatique ont été évalués tels que : la viabilité spermatiques avec la sonde SYBR14 / IP en cytométrie de flux ; la motilité ainsi que les paramètres de vitesse et de trajectoire associés à l'aide du système CASA (Computer Assisted Sperm Analysis) et ; la peroxidation lipidique (TBARS). De façon générale, l’augmentation de la peroxydation lipidique sur les spermatozoïdes cryoconservés a permis de valider la LPO comme marqueur d’évaluation de la cryoconservation de par sa reproductibilité et sa sensibilité. A la suite des analyses menés à l’aide des différents marqueurs de qualité spermatique, des quatre concentrations testées dans les paillettes, les concentrations de 5.109 et de 1,25.109 spermatozoïdes/ mL de sperme ont présenté les meilleurs résultats signifiant l’intérêt de ces deux concentrations afin de minimiser l’effet néfaste de la cryoconservation.