Caractérisation des éléments favorisant l'interaction RBM39/c-Jun en conditions génotoxiques

Abstract

L’ADN peut subir des dommages causés par divers agents génotoxiques présents dans l’environnement. En l'absence de réparations de ces anomalies, les altérations de la structure génétique sont susceptibles de provoquer des mutations, des perturbations chromosomiques et le déclenchement de processus cancéreux ou la mort cellulaire. Les cellules tumorales présentent souvent des réponses aux dommages à l’ADN altérées ce qui ouvre une fenêtre thérapeutique où les cellules cancéreuses sont plus sensibles aux traitements chimio-thérapeutiques (par exemple : le cisplatine) que les cellules saines. Durant ce projet de mémoire, nous nous sommes focalisés sur deux protéines : c-Jun et RBM39. En effet, une interaction accrue entre ces deux protéines a été observée lors de l’ajout de cisplatine (50 µM, 24h) en cellules MCF-7. Cette interaction module l’activité de RBM39 et dès lors affecte l’expression de milliers de transcrits dans les cellules tumorales. Cependant, les éléments favorisant l’inductibilité de cette interaction sont actuellement inconnus. Afin de les identifier, des tests de complémentation enzymatique (Luciférase) ont été effectués sur des cellules HEK293 en conditions basales et de stress. Des mises au point ont permis d’établir que, pour ces cellules, un traitement de 16h au cisplatine (25 µM) était le plus adapté pour maintenir un niveau d’expression similaire des partenaires protéiques. Ces tests nous ont permis de conclure que, (i) les mêmes domaines participent à l’interaction RBM39/c-Jun en conditions basales ou génotoxiques et, (ii) un domaine unique n’est pas responsable de l’interaction RBM39/c-Jun mais plusieurs interviennent. Différents mutants de délétion de RBM39 ont donc été créés afin de tester leur interaction avec c-Jun. D’après ces résultats, le domaine DD, RRM2, c-Jun IDT et ER de RBM39 auraient un effet positif sur l’interaction tandis que le domaine RRM3 réduirait l’interaction de RBM39 avec c-Jun. En analysant leur localisation intracellulaire, on remarque que les mutants dépourvus du domaine DD de RBM39 perdent leur localisation nucléaire. En plus, plusieurs familles distinctes d’agents chimio-thérapeutiques ont été testées et toutes induisent une interaction plus forte qu’en conditions basales. Une analyse de spectrométrie de masse a permis d’identifier des modifications post-traductionnelles de la protéine RBM39 induites par le cisplatine. Suite à cette analyse et à un relevé de la littérature, les sérines 136 et 337 ont été mutées en alanine. Cependant, les tests de complémentation enzymatique ont montré que la phosphorylation de ces résidus n’a aucun effet sur l’interaction. Le but à long terme étant de définir une cible thérapeutique correspondant à la zone d’interaction minimale de RBM39 avec c-Jun pour perturber l'interaction à l'aide de petits peptides ou produits chimiques.