Thesis, COLLÉGIALITÉ

Abstract

L’insuffisance rénale peut être de deux types, aiguë ou chronique. Lorsqu’elle est chronique, elle peut se développer en insuffisance rénale terminale. Le traitement de choix pour soigner l’insuffisance rénale terminale est la transplantation. Cependant lors de cette procédure chirurgicale, l’organe est soumis à de nombreuses lésions d’ischémie/reperfusion qui peuvent engendrer une reprise retardée de la fonction du greffon (DGF). Cette DGF est définie comme étant la nécessité de mettre le patient sous dialyse durant la première semaine après la transplantation et elle est associée à un risque accru de rejet du greffon ainsi qu’à une diminution de la survie du greffon sur le long-terme. Dans ces circonstances, il est nécessaire de développer de nouvelles thérapies permettant de diminuer ces lésions d’ischémie/reperfusion et par conséquent de diminuer les risques de DGF. Les cellules stromales mésenchymateuses sont utilisées comme thérapie cellulaire afin de diminuer ces lésions d’ischémie/reperfusion et in fine améliorer la qualité du greffon. Dans le cadre de ce mémoire, une méthode de tracing à l’aide du colorant membranaire CM-DIL a été développée et mise au point afin de déterminer la localisation des cellules stromales mésenchymateuses après injection chez le rat. 4 rats femelles Lewis ont été injectées avec 1,5 millions de cellules stromales mésenchymateuses dérivées de rats mâles marquées au CM-DIL. Six heures après l’injection des CSM marquées, les rats femelles injectées et les contrôles sont sacrifiés afin de prélever les foies, poumons et reins. De ces prélèvements sont réalisés d’une part des coupes histologiques et d’autres part les organes sont broyés afin de les réduire en poudre et d’en extraire l’ADN génomique à partir duquel une PCR quantitative sera réalisée pour détecter la présence ou non du gène « masculin » Sry au sein des échantillons. Les résultats obtenus ont démontré que la méthode la plus optimale pour tracer efficacement les CSM marquées avec du CM-dil est de travailler à une concentration de 8µM avec une incubation 15 minutes à 37°C. Après injection intraveineuse des CSM marquées, celles-ci sont retrouvées principalement dans les poumons des femelles injectées. Ces résultats sont obtenus à la fois par l’analyse histologique et par l’analyse de la PCR quantitative. En conclusion, la méthode de traçage développée au laboratoire suggère que les CSM marquées après injection intraveineuse chez le rat sont retrouvées au niveau des poumons et ne traversent pas ou peu les capillaires pulmonaires. Cela suggère donc une action endocrine des CSM qu’il serait intéressant d’investiguer en mettant au point une méthode de tracing des vésicules extracellulaires dérivées des cellules stromales mésenchymateuses.

Kidney disease can be of two types, acute or chronic. When it is chronic, it can develop into end-stage renal failure. The treatment of choice for end-stage renal disease is transplantation. However, during this surgical procedure, the organ is subjected to numerous ischemia/reperfusion lesions that can lead to delayed graft function (DGF). DGF is defined as the need to place the patient on dialysis during the first week after transplantation and is associated with an increased risk of graft rejection and reduced long-term graft survival. In these circumstances, it is necessary to develop new therapies to reduce ischemia/reperfusion lesions and consequently reduce the risk of DGF. Mesenchymal stromal cells are used as a cell therapy to reduce ischemia/reperfusion damage and ultimately improve graft quality. In this thesis, a tracing method using the membrane dye CM-Dil was developed to determine the location of mesenchymal stromal cells after injection in rats. Four female Lewis rats were injected with 1.5 million labelled mesenchymal stromal cells. Six hours after injection of the labelled MSCs, the injected female rats and the controls were sacrificed to harvest the livers, lungs and kidneys. Histological sections were taken from these samples and the organs were ground to powder to extract the genomic DNA from which a quantitative PCR was performed to detect the presence or absence of the Sry gene in the samples. The results obtained showed that the most optimal method to track efficiently the MSC labelled with CM-dil is to work at a concentration of 8µM with incubation for 15 minutes at 37°C. After intravenous injection of the labelled MSCs, they were found in the lungs of the injected females. These results were obtained both by histological analysis and by quantitative PCR analysis. In conclusion, the tracing method developed in the laboratory suggests that labelled MSCs after intravenous injection in rats are found in the lungs, as they are unable to cross the pulmonary capillaries. This suggests an endocrine action of MSCs, which it would be interesting to investigate by developing a method for tracing extracellular vesicles derived from mesenchymal stromal cells.