Thesis, COLLÉGIALITÉ

Abstract

Le cancer du sein est le cancer le plus répandu et le plus mortel chez la femme. Parmi les différents types de cancer du sein, le cancer du sein triple négatif (TNBC) représente environ 15% de tous les cancers du sein invasifs, et est celui avec le moins bon pronostic, notamment à cause son hétérogénéité, de sa capacité à proliférer et à faire des métastases rapidement, ainsi que son haut taux de récidive. Dans le cadre des traitements contre le cancer, l’immunothérapie est au premier plan de la recherche, notamment les traitements inhibiteurs de checkpoints immunitaires (ICIs), qui ont pour but d’empêcher les cellules tumorales d’échapper au système immunitaire et de réactiver celui-ci. Malheureusement, un grand nombre de patientes ne répondent pas ou peu à ce type de traitement. La ferroptose est une mort cellulaire non-apoptotique, dépendante du fer, et caractérisée par une accumulation non régulée de lipides peroxydés à la membrane des cellules, ce qui va entrainer la rupture de celle-ci. Notre objectif est d’induire la ferroptose dans des cellules de TNBC, afin que celles-ci relarguent dans le milieu extracellulaire des signaux pouvant être reconnus par les cellules du système immunitaire, qui sera alors activé et ciblera les cellules tumorales. Pour ce faire, nous utilisons différents inducteurs de ferroptose : un inhibiteur de la Stéaroyl-CoA Désaturase1 (SCD1i), un inhibiteur de la Fatty Acid-Binding Protein 4 (FABP4i), RSL3 (RAS-selective lethal 3) et de l’acide eicosapentaénoïque (EPA). Des cellules de TNBC humaines et murines, les lignées MDA-MB231 et E0771, ont été traitées pendant 24h avec l’un des inducteurs de ferroptose, après quoi les milieux conditionnés, les protéines et les ARNm ont été récoltés et analysés. Nous avons étudié la modulation de l’expression et de la production des protéines régulatrices de la ferroptose SCD1, FABP4 et GPX4 (glutathion peroxydase 4) au sein de ces cellules traitées via les inducteurs de ferroptose en Western-Blot et RT-qPCR. Nous avons également étudié la modulation de l’expression et de la production de 2 cytokines/chimiokines proinflammatoires, MIF (Macrophage migration inhibitory factor) et de l’interleukine-8 (IL-8) en Western-Blot et RT-qPCR, ainsi que les niveaux de ceux deux chimiokines relargués dans le milieu par les cellules ferroptotiques à l’aide d’un ELISA. Nous avons découvert une augmentation des taux de ces 2 cytokines dans le milieu des cellules traitées avec des inducteurs de la ferroptose. À la suite de cela, nous avons étudié l’effet que ces milieux proinflammatoires peuvent avoir sur des cellules du système immunitaire. Pour cela, nous avons extrait les cellules immunitaires de la rate de souris, que nous avons mises en culture pendant 6h dans les différents milieux conditionnés, que nous avons ensuite analysées et caractérisées en cytométrie en flux. Nous avons mis en évidence une régulation des checkpoints immunitaires (CIs) PD-1, LAG3, Tim3 et CTLA-4 à la surface de nombreuses sous-populations immunitaires, et plus particulièrement une diminution de ces CIs avec le milieu conditionné par SCD1i.