Amélioration de la résistance thermique de la superfolder green fluorescent protéine par le logiciel Fireprot et construction d'un pipeline en microfluidique

Abstract

Mon travail s’est concentré sur l’amélioration de la résistance thermique de la sfGFP. Nous avons produit des colonies porteuses de versions mutées de sfGFP. Les mutations avaient été prédites par le logiciel Fireprot dans le but de former une protéine plus résistante thermiquement. Nous avons pu mettre en évidence quatre colonies avec une version améliorée de la sfGFP répondant à cette demande. En collaboration avec l’équipe de la société LifeDrop, nous avons exploité la microfluidique pour former des microgouttelettes injectables dans des puces d’analyse, restant stables pendant 24 heures. Ces gouttes ont permis le fonctionnement du kit CFE et la production intra-goutte de notre protéine. De plus, nous avons observé la multiplication des cellules d’Escherichia coli dans les gouttelettes. Bien que ce projet ambitieux ne soit pas encore terminé, il a progressé jusqu’à une étape cruciale. Le logiciel Fireprot nous a bien fourni des positions qui, une fois mutées, accroissent la résistance thermique de la sfGFP. Parallèlement, la mise en place d’une stratégie de travail pour l’évolution dirigée, facilitée par l’étude à haut débit offerte par la microfluidique et les systèmes d’expression in vitro, a généré des résultats prometteurs bien qu’ils ne soient pas encore aboutis.