Mémoire

Abstract

Etude du rôle des facteurs nr6a1a et nr6a1b dans le développement embryonnaire du poisson zèbre Le laboratoire Zebrafish Development & Disease Models (ZDDM) collabore avec le service de génétique humaine et vise à identifier des variants génétiques potentiellement pathogènes chez des patients souffrant de malformations rénales. Dans ce cadre, des mutations dans le gène nr6a1 ont été découvertes par séquençage de l'exome entier chez deux familles. Pour évaluer la responsabilité de ce gène dans les malformations rénales, les gènes orthologues nr6a1a et nr6a1b ont été inactivés chez le poisson-zèbre par la technique CRISPR/Cas9. Ce travail a comme objectif de comparer les effets de l'acide rétinoïque et des mutations des gènes nr6a1a et nr6a1b chez le zebrafish pour déterminer si ces gènes agissent comme médiateurs du signal de l'acide rétinoïque. Pour cela, des techniques d'hybridation in situ ont été utilisées pour visualiser l'expression de plusieurs gènes dans les mutants nr6a1a/b et sur des embryons traités par le DEAB. L'étude analyse également si les arcs branchiaux sont affectés chez les mutants nr6a1a/b comme c'est le cas dans les embryons dépourvus d'acide rétinoïque. Cette étude montre qu’une partie des gènes régulés par l'AR, est également sous le contrôle de nr6a1, c’est notamment le cas pour le gène irx3b. De même, evx1, un marqueur du cloaque, est régulé de manière redondante par nr6a1a/b et par l’AR. En outre, la régulation de cyp26a1 par nr6a1a révèle une potentielle boucle de rétroaction, où nr6a1 réprime cyp26a1, qui à son tour dégrade l'AR, impliquant ces gènes dans le maintien des concentrations d'AR dans l'embryon. Cette régulation pourrait expliquer les similitudes phénotypiques entre les mutants nr6a1a/b et les mutants affectés dans la synthèse de l'AR. Nr6a1a/b pourraient être essentiel pour maintenir les concentrations d'AR dans l'embryon. Des expériences futures seront nécessaires pour confirmer cette hypothèse et pour mieux comprendre le rôle précis de nr6a1a/b dans la régulation de l'AR.