Cancer du pancréas: caractérisation de nouveaux modèles zebrafish

Abstract

L'adénocarcinome canalaire pancréatique (PDAC), forme la plus fréquente du cancer du pancréas, est généralement diagnostiqué tardivement en raison de son caractère insidieux. L’absence de symptômes précoces amène à un diagnostic plus difficile, ce qui limite considérablement l’espérance de vie. Seulement 12 % des patients survivent au-delà de cinq ans. Il est impératif d’améliorer les recherches pour mieux comprendre cette maladie complexe afin de permettre un diagnostic plus précoce et de développer des traitements plus efficaces. L’utilisation croissante du poisson-zèbre en recherche s'explique par sa forte similarité génétique avec l'humain, environ 70 % des gènes humains ont des homologues chez ce poisson. Cette correspondance en fait un modèle précieux pour étudier le cancer et d'autres maladies humaines. L’oncogène KRAS est retrouvé muté dans 90 % des cas de PDAC, ce qui en fait une cible clé pour la recherche. Dans mon laboratoire d’accueil, des précédents modèles de tumeurs pancréatiques d’origine acinaire et canalaire, exprimant l’oncogène KRASG12D fusionné à la GFP, chez le poisson-zèbre, ont été générés et caractérisés. Cependant, ce modèle acinaire est transitoire. Pour y remédier, trois nouveaux modèles expérimentaux d’origine acinaire, avec des promoteurs différents, basés sur le système Cre/lox et Gal4/UAS, ont été générés. L’objectif de ce mémoire est de développer et de caractériser ces modèles pour évaluer leur fonctionnalité et leur capacité à induire des tumeurs. Au stade larvaire, la fluorescence du pancréas n’a pas pu être mise en évidence en raison de faible intensité du signal et de l’auto-fluorescence du tube digestif. Cependant, une analyse par immunohistochimie a permis de détecter la présence d’eGFP-KRASG12D dans les trois modèles, bien que l’expression soit limitée à quelques cellules dans la tête du pancréas. Afin de déterminer si cette expression perdure dans le temps, des PCR sur l’ADN et ARN du pancréas de poissons adultes ont été réalisées. Elles ont permis de confirmer la recombinaison génétique. Cependant, l'expression des transcrits de eGFP-KRASG12D semble exprimée principalement dans un modèle. Dans ce dernier, le pancréas de deux poissons a été disséqué et analysé à des fins histologiques. Une coloration à l’hématoxyline et l’éosine a permis de détecter la présence d’une masse cellulaire atypique. Une analyse d’immunohistochimie appuie sur le fait que cela serait très probablement une tumeur pancréatique. Ces résultats indiquent que les différents modèles nécessitent des recherches plus approfondies. Néanmoins, ces modèles, dont un préférentiellement, sont prometteurs au développent de tumeurs pancréatiques.