Identification de cellules souches de glioblastome résistantes à la virothérapie utilisant un hèrpesvirus oncolytique

Abstract

Le glioblastome (GBM) est la tumeur cérébrale primaire la plus fréquente et agressive chez l’adulte, avec une survie moyenne d’environ 15 mois malgré la chirurgie, la radiothérapie et la chimiothérapie. Les Glioblastoma Stem-like Cells (GSCs) échappent à la résection chirurgicale et sont résistantes aux traitements conventionnels, contribuant fortement au pronostic défavorable. Face à cette résistance, de nouvelles stratégies thérapeutiques ont été développées, parmi lesquelles la virothérapie oncolytique utilisant un herpèsvirus oncolytique (oHSV). Néanmoins, l’efficacité des virus oncolytiques est hétérogène et limitée par des mécanismes de résistance. L’objectif de ce travail est de comparer la capacité d’infection et de cytotoxicité du virus, HSV-wt et de sa forme modifiée oHSV (oHSV-ΔICP34.5/ΔICP47/ΔICP6) qui lui confère des propriétés oncolytiques, sur différentes lignées de Glioblastoma Stem-like Cells (GSCs), afin de mettre en évidence des cellules de patients résistantes à oHSV et/ou à HSV-wt. Pour répondre à cette problématique, plusieurs approches expérimentales ont été mises en œuvre. Après un test comparatif de propagation entre HSV-wt et oHSV et des expériences en culture 2D, le modèle 3D a été étudié. La viabilité cellulaire et le taux d’infection des GSCs ont été évalués par cytométrie en flux, tandis que la microscopie confocale a permis de visualiser la dynamique et la localisation de l’infection. Des titrations virales ont quantifié la libération de particules virales, et la présence des récepteurs de HSV à la surface des cellules a été exa minée pour évaluer la pénétration virale. Enfin, la morphologie des sphéroïdes a été analysée par microscopie à contraste de phase. Ces analyses ont révélé plusieurs profils : une lignée aussi sensible à oHSV qu’à HSV-wt (T049), des lignées très sensibles à HSV-wt mais présentant une sensibilité variable à oHSV (T018, T033 et T055), ainsi qu’une lignée sensible à HSV-wt mais totalement résistante à oHSV (T042). Ces résultats suggèrent que la sensibilité des GSCs à la mort induite par HSV-wt et oHSV présente un spectre continu, allant d’une forte sensibilité à une résistance complète à oHSV, plutôt que de se limiter à deux phénotypes distincts, sensibles ou résistants.