Etude du mécanisme d'inhibition des granules de stress par le Virus de la Varicelle et du Zona

Abstract

Lors de la perception de certains facteurs intrinsèques et/ou extrinsèques par des kinases eIF2, la cellule déclenche la réponse intégrée au stress (ISR), aboutissant à l’assemblage de granules de stress (GS). Ces granules d’ARN sont des biocondensats moléculaires qui interviennent dans de nombreux processus cellulaires, dont la réponse antivirale. En conséquence, de nombreux virus ont développé des stratégies pour empêcher leur formation ou augmenter leur désassemblage. Des données préliminaires obtenues au laboratoire ont démontré que le Virus de la Varicelle et du Zona (VZV) est à l’origine d’une inhibition de la formation des GS induite par l’arsénite, la thapsigargine et un choc thermique.

Dans l’optique d’étudier la stratégie d’inhibition des GS exploitée par VZV, l’identification de la/des protéine(s) virale(s) impliquée(s) dans ce mécanisme est cruciale. Ainsi, parmi les 71 ORFs encodés par le virus, des souches de VZV KO pour six d’entre eux (ORF1, ORF3, ORF36, ORF58, ORF59 et ORF65) ont été générées par la méthode de clonage « en passant », puis criblées. Ce phénotypage a mis en évidence que la délétion de ces protéines n’a pas d’impact sur la proportion de cellules infectées présentant des GS après un traitement à l’arsénite.

Afin de définir la classe de gènes à laquelle appartient celui/ceux qui encode(nt) la(les) protéine(s) de VZV responsable(s) de l’inhibition des GS, une cinétique d’infection a été réalisée. Dans cette expérience, de l’acide phosphonoacétique (PAA) a été ajouté dans la moitié des conditions, afin d’inhiber la réplication de l’ADN génomique viral et donc l’expression de tous les gènes tardifs. La synchronisation de l’infection a nécessité l’utilisation d’un lysat de cellules infectées comme inoculum. En conséquence, de nombreuses cellules infectées présentaient des GS spontanées, probablement dus à une synergie entre le mode d’infection et la présence de macromolécules cellulaires et virales dans l’inoculum. Dans ces conditions, l’ajout d’arsénite réduit la proportion de cellules infectées présentant des GS, suggérant que l’arsénite pourrait également activer une protéine virale favorisant le désassemblage des GS. Enfin, l’effet du PAA n’a pas pu être interprété de façon certaine.