Analyse du métabolisme de l'acétate chez Chlamydomonas reinhardtii

Abstract

Lors de mon mémoire, je me suis intéressé au métabolisme de l’acétate chez Chlamydomonas reinhardtii. En effet, cette algue verte pousse en condition phototrophe (lumière + CO2), mixotrophe (lumière + acétate) et hétérotrophe (à l’obscurité) en métabolisant l’acétate. Lors de la culture en présence d’acétate, la concentration usuelle est de 17mM, et nous possédons peu d’informations sur la réponse cellulaire à de plus hautes concentrations en acétate. Je me suis donc penché sur l’analyse du métabolisme de l’acétate en comparant les résultats métaboliques et physiologiques de la culture de Chlamydomonas en concentration faible (17mM) et élevée (57,5mM) en acétate, ainsi que sur l’étude d’un mutant d’une enzyme du cycle du glyoxylate.

La première partie consiste en l’étude d’un mutant d’une enzyme du cycle du glyoxylate, la malate synthase, obtenu hors de la banque de mutants insertionnels CLIP.

Dans la deuxième partie, je dispose d’une analyse transcriptomique de la réponse de Chlamydomonas à des concentrations en acétate plus élevées que la concentration habituellement utilisée (projet européen BAMBI). J’ai tenté de valider l’analyse transcriptomique par des techniques de biologie moléculaire et de biochimies. Pour ce faire je me suis intéressé à l’autophagie, en particulier à la différence du niveau d’expression de la protéine ATG8 (Western Blot) entre les algues cultivées en présence de 17 mM en acétate et les algues cultivées en présence de 57,5 mM en acétate. J’ai également analysé la photosynthèse (dégagement d’O2), dans ces deux conditions de culture.

J’ai également réalisé des analyses métaboliques complémentaires de ces algues cultivées dans les deux concentrations en acétate (17 et 57,5 mM). Dans cette optique, j’ai dosé la chlorophylle, les protéines totales, l’amidon ainsi que le poids sec, afin de voir s’il y a une différence de production de biomasse entre ces deux conditions de culture.