Thesis, COLLÉGIALITÉ, FRANZEN Rachelle

Abstract

Parmi les altérations génétiques retrouvées dans l’adénocarcinome pulmonaire, la mutation V600E du gène BRAF active de manière constitutive la voie des MAP kinases , poussant la cellule à la prolifération, la survie, l’invasion et au développement de métastases. Le traitement de ce type de cancer repose sur une thérapie ciblée combinant le dabrafenib, agissant sur la forme mutée de BRAF et le trametinib, un inhibiteur de MEK. Malgré une réponse initiale favorable, cette approche est généralement compromise par l’émergence de résistance. Cette résistance s’explique par la présence de cellules tolérantes et persistantes au traitement, qui constituent le réservoir favorisant l’apparition ultérieure de cellules génétiquement résistantes. Ainsi, cibler ces cellules persistantes demeure une stratégie prometteuse pour prévenir le développement des cellules résistantes. Ces dernières années, l’immunothérapie a pris une place centrale dans le traitement contre l’adénocarcinome pulmonaire à un stade métastatique. Son essor récent souligne l’importance de définir l’ordre dans lequel administrer la thérapie ciblée et l’immunothérapie aux patients. Notre hypothèse est que l’état persistant induit par le traitement par thérapie ciblée favorise la surexpression de certains points de contrôle immunitaire par les cellules tumorales. L’objectif de ce travail est donc d’identifier l’expression d’un panel de points de contrôle immunitaire, ainsi que les voies de signalisation impliquées dans leur régulation, au sein de deux lignées cellulaires tolérantes à la thérapie ciblée. L’expression génique et protéique des points de contrôle immunitaire ont été évaluées par PCR quantitative en temps réel et cytométrie en flux, respectivement. Les facteurs de transcription susceptibles d’être impliqués dans leur régulation, ainsi que les voies de signalisation associées, ont été analysés par Western Blot. Finalement, les concentrations inhibitrices médiane (IC50 ) d’un deuxième couple d’inhibiteurs de BRAF et MEK, l’encorafenib et le binimetinib, ont été déterminées à l’aide du test d’activité mitochondriale MTT et du test de clonogénicité au crystal violet, afin d’établir un nouveau modèle cellulaire de persistance à la thérapie ciblée. Nos résultats ont révélé une augmentation de l’expression de certains points de contrôle immunitaire dans les cellules persistantes par rapport à leurs homologues parentales. En revanche, les voies de signalisation impliquées dans la régulation de ces points de contrôle n’ont pas pu être clairement identifiées, nécessitant des analyses complémentaires. Enfin, les IC50 de l’encorafenib et du binimetinib n’ont pas pu être déterminées non plus, et ce malgré l’utilisation de deux méthodes différentes d’évaluation de la viabilité cellulaire.