Contribution à l’analyse de la famille des ascorbate peroxydases chez la microalgue verte Chlamydomonas reinhardtii

Abstract

Chez la microalgue Chlamydomonas reinhardtii, la famille des ascorbate peroxydases contient trois membres, une ascorbate peroxydase classique (APX1), une ascorbate peroxydase de type R (APX2) et une ascorbate peroxydase de type L (APX4). Ces trois enzymes sont localisées dans le chloroplaste mais leur rôle précis n’a pas encore été défini. En ce qui concerne APX2 et APX4, leur localisation intra-chloroplastique n’a pas encore été démontrée. Mon travail de mémoire a consisté en l’isolement de souches exprimant des versions étiquetées de ces peroxydases. Pour ce faire, des mutants perte de fonction ont été transformés avec des versions géniques encodant des enzymes comportant une étiquette 3xFLAG à l’extrémité C-terminale. Les transformants exprimant ces constructions ont été isolés par Western blotting à l’aide d’anticorps dirigés contre les peroxydases. Ils serviront aux analyses d’interactome, réalisées par des expériences de co-immunoprécipitation. Des croisements entre les mutants apx1 et apx2 ont également été réalisés. Les doubles mutants apx1/apx2 ont été sélectionnés par Western blotting et seront caractérisés physiologiquement. Enfin, une technique de fractionnement des thylakoïdes a été mise au point. Elle pourra être utilisée pour déterminer la localisation intra-chloroplastique des ascorbate peroxydases.