Développement et caractérisation de nano-anticorps (VHH) dirigés contre LasB, une métalloprotéase de virulence de Pseudomonas aeruginosa, et mise au point d'une stratégie de purification de LasB par affinité

Abstract

Face à la résistance bactérienne croissante aux antibiotiques, les approches antivirulence, ciblant les facteurs de virulence plutôt que la viabilité bactérienne, constituent une stratégie thérapeutique complémentaire prometteuse. Ce travail visait à isoler, par phage display, de nouveaux VHH ciblant une métalloprotéase bactérienne d'intérêt thérapeutique, soit pour améliorer l'activité inhibitrice et la stabilité d'un candidat déjà identifié, soit pour développer un outil de détection par ELISA sandwich. Sur 9 candidats caractérisés, aucun n'a montré d'activité inhibitrice significative, mais deux ont démontré une liaison spécifique à la cible, cohérente avec une reconnaissance en dehors du site fonctionnel ; les 7 autres candidats semblent correspondre à des clones non spécifiques enrichis de façon artéfactuelle. Ce travail a par ailleurs permis d'établir un protocole de purification de LasB par affinité VHH à partir d'un surnageant de culture, avec un rendement de 68,6% sur billes magnétiques, contre 12,9% pour une approche alternative sur résine dont les mécanismes de perte restent à élucider.