Induction des granules de stress par l'ORF61 du Virus de la Varicelle et du Zona

Abstract

Lorsque la cellule détecte un stress extrinsèque ou intrinsèque grâce à ses kinases d’eIF2α, elle déclenche la réponse intégrée au stress (ISR) afin d’y répondre et d’assurer sa survie. Ce mécanisme entraine de grands changements dans l’homéostasie cellulaire, dont l’arrêt global de la traduction et la formation de biocondensats cytoplasmiques appelés granules de stress (GS). Ces structures dynamiques possèdent des fonctions diverses, certaines intervenant dans la réponse antivirale. De ce fait, de nombreux virus ont développé des stratégies afin d’empêcher l’activation de l’ISR et la formation des GS dans le but de réaliser leur cycle de réplication. Des résultats préliminaires obtenus au laboratoire ont confirmé la capacité du Virus de la Varicelle et du Zona (VZV) à inhiber la formation des GS après différents stress testés. Des expériences d’expression transitoire des protéines immédiates-précoces (IE) de VZV réalisées au laboratoire ont révélé que la transfection d’un plasmide codant pour la protéine IE61 provoquait la formation de GS dans les cellules ARPE-19. Nous avons donc souhaité investiguer l’effet de cette expression transitoire sur l’induction des granules de stress. Pour cela, nous avons transfectés des cellules ARPE-19 avec le plasmide exprimant IE61 et avons regardé l’activation de l’ISR dans ces conditions. Nous avons également effectué des expériences de cinétique de transfection et enfin d’hybridation in situ fluorescente de l’ARN. Nous avons découvert que la formation des GS observées dans ces conditions est probablement due à l’activation de l’ISR via l’axe de la kinase PKR. Au fil de nos expériences, deux hypothèses expliquant le déclenchement de PKR ont émergé : une activation directe par l’ARNm d’IE61 ou une surexpression de PKR découlant potentiellement d’une action de la protéine IE61, de son transcrit ou de leur combinaison.