Etude de la métallo -ß-lactamase de sous-classe B2 YEM-1, produite par Yersinia mollaretii Wauters
Blétard, Sylvie
Promoteur(s) : Galleni, Moreno
Date de soutenance : 6-sep-2017 • URL permanente : http://hdl.handle.net/2268.2/3360
Détails
Titre : | Etude de la métallo -ß-lactamase de sous-classe B2 YEM-1, produite par Yersinia mollaretii Wauters |
Auteur : | Blétard, Sylvie |
Date de soutenance : | 6-sep-2017 |
Promoteur(s) : | Galleni, Moreno |
Membre(s) du jury : | Mercuri, Paola
Kerff, Frédéric Damblon, Christian Dumoulin, Mireille |
Langue : | Français |
Nombre de pages : | 49 |
Discipline(s) : | Sciences du vivant > Biochimie, biophysique & biologie moléculaire |
Institution(s) : | Université de Liège, Liège, Belgique |
Diplôme : | Master en biochimie et biologie moléculaire et cellulaire, à finalité approfondie |
Faculté : | Mémoires de la Faculté des Sciences |
Résumé
[fr] Depuis plusieurs décennies, l’utilisation intensive et parfois abusive des antibiotiques est l’une des causes majeures de l’émergence de souches bactériennes résistantes. Parmi un ensemble de mécanismes développés par celles-ci pour contrer l’effet létal des antibiotiques, la production de β-lactamases est le moyen le plus répandu. Ces enzymes rendent les antibiotiques à noyau β-lactame inactifs par hydrolyse de leur noyau β-lactame. Les β-lactamases se divisent en deux familles, les β-lactamases à sérine active (classe A, C et D de la classification d'Ambler) et les métallo-β-lactamases (MBLs) (classe B), qui se répartissent à leur tour en trois sous-classes : B1, B2, B3. Les métallo-β-lactamases de sous-classe B2 sont des carbapénèmases strictes. Parmi les enzymes de cette sous-classe, CphA est une métallo-β-lactamase bien connue. Une analyse bioinformatique des banques de données, en utilisant la séquence de l'enzyme CphA comme référence, a permis d’identifier quatre nouvelles MBLs potentielles qui appartiendraient à la sous-classe B2. L’une d’entre elles, YEM-1, est produite par Yersinia mollaretii.
Notre travail se porte sur la caractérisation de YEM-1. La protéine YEM-1 a été produite, purifiée et caractérisée. Etant donné qu’elle est supposée appartenir à la sous-classe B2, son profil d’activité est comparé à celui de CphA. L’étude cinétique de cette protéine montre une efficacité catalytique réduite pour l’ensemble des carbapénèmes testés (à l’exception de l’imipénème) par rapport à CphA. L'effet des ions métalliques (Zn2+, Co2+ et Cd2+) et d'agents chélatants (EDTA, phénantroline, acide dipicolinique) sur l'activité de YEM-1 montre qu'elle a une affinité réduite par rapport à CphA pour la fixation d'un second ion zinc et qu'elle est plus résistante à l'effet des chélatants. La comparaison de la structure tridimensionnelle de CphA et du modèle de la structure de YEM-1 met en évidence trois résidus (Y63, T158, S236) proches du site actif qui pourrait influencer l'activité enzymatique de YEM-1. Les résidus Y63 et S236 ont été modifiés par mutagenèse dirigée afin de restaurer les acides aminés présents chez CphA. Parmi ceux-ci le mutant Y63V de YEM-1 a été produit et purifié. Sa caractérisation cinétique démontre une augmentation de l’efficacité catalytique du mutant par rapport à l’enzyme sauvage.
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