Caractérisation de l'interaction entre le facteur de transcription FOXM1 et le complexe de déadénylation CCR4-NOT.

Abstract

Il a récemment été découvert que des facteurs de transcription pouvaient agir sur la dégradation des ARN. Cela a été observé par le Dr. Xavier Rambout du laboratoire de Signalisation et Interaction des Protéines de Franck Dequiedt. Il a démontré que le facteur de transcription ERG peut interagir avec le complexe CCR4-NOT via la sous-unité CNOT2 de celui-ci et induire la dégradation de nombreux ARN. De là, on a émis l’hypothèse qu'ERG n'est sans doute pas le seul facteur de transcription à être impliqué dans la dégradation des ARN. Pour vérifier cette hypothèse, un test a été réalisé sur une série de 33 facteurs de transcription. Il a été observé que le facteur de transcription FOXM1 peut, lorsqu’il est recruté sur un ARN messager rapporteur, réguler sa stabilité. De plus, des analyses de co-immunoprécipitation ont montré que FOXM1 interagit avec le complexe CCR4-NOT. FOXM1 représente une cible particulièrement intéressante puisqu'il se retrouve impliqué dans de nombreux cancers, souvent résistants aux traitements, sa compréhension pourrait donc permettre de trouver de nouvelles pistes contre le cancer. Cette compréhension commence par la caractérisation de l'interaction entre FOXM1 et CCR4-NOT. Pour ce faire, nous avons commencé par identifier la composition du complexe CCR4-NOT interagissant avec FOXM1 par co-immunoprécipitation de FOXM1 avec différentes sous-unités du complexe. Ensuite, nous avons cherché à déterminer quelle(s) sous-unité(s) de CCR4-NOT interagissent directement avec FOXM1 par protein complementation assay. Il en découle que FOXM1 interagit avec CCR4-NOT quel que soit les déadénylases naturelles incorporées. Aucune interaction directe n’a pu être établie sans équivoque, le complexe CCR4-NOT semble englober FOXM1 puisque de nombreuses interactions peuvent apparaître comme directes alors qu’elles seraient plutôt dues à la forte proximité des différentes sous-unités du complexe CCR4-NOT. D’autres expériences de PCA ont été effectuées pour identifier le domaine d’interaction de FOXM1 avec CCR4-NOT. Les résultats montrent que la perte d’un domaine de FOXM1 n’implique pas de perte d’interaction avec le complexe CCR4-NOT. Il est possible que plusieurs domaines de FOXM1 soient impliqués de manière à ce que la perte d’un seul domaine soit compensée par un autre. Dans une nouvelle tentative de perte d’interaction, des siRNAs siCNOT2 et siCNOT3 ont été transfectés dans des cellules avant l’expérience de PCA. Cela a induit une perte d’interaction de FOXM1 avec le complexe CCR4-NOT dans les cellules sous siCNOT3 et non avec siCNOT2, suggérant l’importance de CNOT3 dans l’interaction.