Détermination du régulon de CroR et son implication dans la résistance aux ß-lactamines chez Enterococcus hirae

Abstract

Enterococcus faecalis et Enterococcus faecium sont des bactéries pathogènes opportunistes résistantes à un grand nombre d’antibiotiques et responsables de nombreuses infections nosocomiales à travers le monde. Leur résistance aux antibiotiques à noyau β-lactame provient de la présence d’une Penicillin-Binding Protein (PBP) possédant une faible affinité pour ces agents antibactériens. La surexpression de ce PBP est toujours associée à des niveaux élevés de résistance. Cependant, il apparaît que sa surexpression joue un rôle nécessaire mais pas suffisant pour entraîner la résistance, nécessitant la présence d’un autre élément, encore inconnu à ce jour. Pour l’identifier, des mutants hyper-résistants d’Enterococcus hirae, notre organisme modèle pour l’étude de la résistance chez les entérocoques, nommés B5, B511, M9 et R40 ont été obtenus au sein du laboratoire. Tous ces mutants surexpriment le PBP de faible affinité, nommé PBP5, mais il a également été observé que, chez ces mutants, des mutations étaient toujours présentes au niveau du système à deux composants CroRS. Ce dernier est impliqué dans la résistance aux β-lactamines chez E. faecalis et E. faecium mais son rôle n’est pas encore déterminé. L’objectif principal de ce mémoire porte sur l’étude de CroRS. Dans un premier temps, une analyse bioinformatique a été réalisée, de façon à prédire les structures tridimensionnelles de CroR et de CroS. Cette étude a permis de mettre en évidence une structure dimérique pour les deux protéines et de comprendre le mécanisme d’action de celles-ci. Dans un second temps, ces recherches ont servi à mettre en évidence un potentiel site de liaison à l’ADN pour le régulateur de réponse CroR. Ces séquences nucléotidiques concernent la région en amont de l’opéron croRS. Ce site de liaison est composé de 24 nucléotides contenant deux demi-sites de 8 pb espacées de 4 pb. Afin de vérifier ces prédictions, la protéine CroR a été produite et purifiée dans le but de tester son interaction avec les séquences nucléotidiques cibles par la technique de gel retard. Cependant, les résultats préliminaires obtenus avec les gels retards ne permettent pas de confirmer sans ambiguïté que la séquence identifiée lors de l’analyse in silico est la bonne. Des expériences supplémentaires sont nécessaires pour établir si le régulon de CroR contribue à la résistance aux β-lactamines chez E. hirae.