Mise au point d'un protocole de quantification de l'alpha-synucléine agrégée dans des extraits cérébraux de souris transgéniques, modèles de la maladie de Parkinson

Abstract

La maladie de Parkinson (MP) appartient à une classe de pathologies neurodégénératives, appelées α-synucléinopathies. Elles seraient liées à l’agrégation de l’α-synucléine (aSyn) dans certaines régions du système nerveux central.1 Le diagnostic clinique de la MP permet l’instauration d’un traitement symptomatique généralement tardif. Cependant, ce diagnostic clinique est erroné dans 25% des cas.6,9 Ce mémoire s’inscrit au sein du projet « DiaSyn » qui vise à développer un radiotraceur des agrégats d’aSyn intracellulaire dans le parenchyme cérébral. Ce radiotraceur permettra de poser un diagnostic de certitude non invasif de la MP par l’utilisation d’une neuro-imagerie. Une sonde moléculaire spécifique des agrégats d’aSyn faisant intervenir un nanobody (Nb) a été produite préalablement. Des études préliminaires ex vivo ont démontré que ce Nb était capable de traverser la barrière hématoencéphalique (BHE), de diffuser à travers le parenchyme cérébral, et de pénétrer les cellules nerveuses afin d'interagir avec les agrégats d’aSyn. Néanmoins, le PET (Positon emission tomography) réalisé après une injection intraveineuse (IV) du Nb-18F-Tétrazine dans la queue de souris modèle de la MP, n’a montré aucun signal dans le parenchyme cérébral. Diverses hypothèses peuvent être émises pour expliquer ce résultat. D’une part, la quantité de Nb traversant la BHE serait insuffisante du fait d'une clairance rénale élevée (T1/2 plasmatique = 10 à 30min). D’autre part, il se peut que la quantité d’agrégats d’aSyn présente au sein du parenchyme cérébral lors de la réalisation du PET soit insuffisante pour permettre leur détection par PET. Il faudrait donc corréler l’intensité du signal PET avec la quantité d’agrégats d’aSyn présente dans les neurones, et la quantité de Nb passant la BHE. La mise au point d’un protocole de quantification de l’aSyn agrégée phosphorylée et du Nb sera donc envisagée durant ce mémoire, en utilisant le BLI-ELISA « sandwich ». Pour ce faire, des nanobodies spécifiques de l’aSyn agrégée phosphorylée (pS129) devront être générés et produits au sein d’une banque de phage-Nb immune, nommé Tournesol. Six phages-Nb spécifiques de l’aSyn-pS129 ont permis de produire les Nbs dans E.coli, nommés NbSynIP. Les résultats préliminaires de la caractérisation de ces NbSynIP montre que seule 2 Nbs interagissent avec l’aSyn. La poursuite de la caractérisation des NbSynIP et la mise au point du protocole de quantification de l’aSyn agrégée seront envisagés dans la partie « perspectives ».