Development and Characterization of Recombinant Adeno-Associated Virus Displaying mCherry Proteins at their Surface

Abstract

Le ciblage spécifique des AAV vers un type cellulaire d'intérêt peut ne pas être réalisable avec les sérotypes naturels d'AAV. L'utilisation de nanocorps (nb) couplés aux AAV représente une technologie de choix pour surmonter ces obstacles, permettant de moduler plus facilement le tropisme des AAV avec une grande efficacité, et de développer des thérapies géniques et cellulaires plus efficaces et plus sûres. Ce ciblage optimisé permet de réduire les effets indésirables liés à la transduction d'autres cellules que les cellules cibles. Dans le cadre de notre recherche, nous avons développé et caractérisé des vecteurs viraux recombinants basés sur les virus adéno-associé (rAAV) qui présentent des protéines mCherry à la surface de leur capside, avec pour objectif final de remplacer cette protéine fluorescente par un nanobody possédant une affinité spécifique envers différents récepteurs cellulaires, ce qui pourrait ainsi permettre de rediriger les rAAV de manière efficace. En nous basant sur divers résultats et informations obtenus dans la littérature, nous avons réussi à muter des résidus spécifiques de la capside des rAAV impliqués dans la liaison avec leur récepteur naturel, le protéoglycane sulfate d’héparane (HSPG). En utilisant un phénotypage de cellules transduites avec nos vecteurs modifiés grâce à la cytométrie en flux, nous avons confirmé que ces vecteurs rAAV-mCherry montrent une efficacité de transduction réduite dans les cellules de glioblastome et les cellules LX-1B4, par rapport aux vecteurs rAAV de sérotype 2. Pour augmenter encore la spécificité et l'efficacité de nos vecteurs, nous avons tenté de cloner des séquences de nanobodies dans le gène de la capside. Malgré les obstacles rencontrés nous lors de nos premiers essais de clonage, nous continuons à travailler sur l'établissement d'une méthode robuste et reproductible pour incorporer les séquences de nanobodies dans le gène codant pour les protéines de la capside des AAV.